高磷血癥主要發(fā)生在慢性腎病患者中，醋酸鈣片、碳酸鑭咀嚼片/顆粒、碳酸司維拉姆片/干混懸劑、枸櫞酸鐵片等，是目前治療高磷血癥的局部胃腸道作用的一線藥物，該類藥物通過在腸道內(nèi)與磷結(jié)合形成沉淀，減少磷的吸收以降低體內(nèi)的血磷水平。
  根據(jù)FDA個藥指南及CDE（國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心）建議，需進(jìn)行體外溶出研究、磷酸鹽動力學(xué)結(jié)合研究和磷酸鹽平衡結(jié)合研究，以及體內(nèi)臨床藥效終點研究，來評價受試制劑和參比制劑生物等效性研究。
  截至目前醋酸鈣、碳酸鑭咀嚼片或顆粒、碳酸司維拉姆干混懸劑國內(nèi)已有多個廠家通過一致性評價，但枸櫞酸鐵片目前國內(nèi)還未有仿制藥上市。該品種體外磷結(jié)合等效性評價的方法是非常關(guān)鍵的部分，但該研究具體有哪些挑戰(zhàn)及關(guān)鍵注意事項？本文將結(jié)合指導(dǎo)原則要求與我司前期經(jīng)驗進(jìn)行具體討論與分析。
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  一、體外磷酸鹽結(jié)合等效性評價標(biāo)準(zhǔn)
  FDA及CDE頒布的指導(dǎo)原則中，不同磷結(jié)合劑的體外等效性評價標(biāo)準(zhǔn)匯總?cè)缦拢?br />   二、體外磷結(jié)合等效性挑戰(zhàn)
  ▍復(fù)雜代謝路徑
  枸櫞酸鐵在胃腸道中主要通過局部結(jié)合磷酸鹽發(fā)揮作用，而非系統(tǒng)性吸收，傳統(tǒng)血藥濃度檢測方法難以直接評估其生物等效性。
  ▍替代指標(biāo)選擇
  需依賴體外磷酸鹽結(jié)合能力、鐵釋放速率等替代參數(shù)，結(jié)合臨床終點（如血磷下降幅度、鐵代謝指標(biāo)）進(jìn)行綜合判斷。
  ▍方法學(xué)局限性
  體外試驗無法完全模擬人體胃腸環(huán)境（如pH波動、食物成分干擾），需通過多批次重復(fù)試驗和交叉驗證提高數(shù)據(jù)可靠性（要求至少n=12）。
  ▍支持監(jiān)管申報
  FDA和EMA、NMPA均要求提交體外結(jié)合試驗數(shù)據(jù)作為仿制藥開發(fā)的必要證據(jù)，以證明與原研藥的理化特性一致。
  三、實驗設(shè)計研究要點
  ▍磷酸鹽濃度
  結(jié)合試驗應(yīng)至少包含8個不同的磷酸鹽濃度，包括達(dá)到結(jié)合平臺的最高磷酸鹽濃度，約最高磷酸鹽濃度1/10的最低磷酸鹽濃度，以及介于最高和最低之間的其余磷酸鹽濃度。
  ▍磷酸鹽動力學(xué)結(jié)合研究測定時間點
  每個條件下應(yīng)在24 h內(nèi)選擇至少8個時間點。需特別注意達(dá)到平臺期前的時間點不能太少，以反映受試制劑和參比制劑動力學(xué)變化趨勢。
  ▍磷酸鹽平衡結(jié)合研究濃度和孵育時間
  平衡研究磷酸鹽的濃度需結(jié)合正常體內(nèi)每天攝入磷酸鹽量，制劑規(guī)格，溶液體積等綜合評定。孵育時間根據(jù)動力學(xué)達(dá)到穩(wěn)態(tài)的時間進(jìn)行合理選擇。
  ▍pH監(jiān)控
  對于動力學(xué)和平衡試驗都需要提供詳細(xì)的pH監(jiān)控方法、記錄、間隔時間等。
  四、實驗設(shè)計研究要點
  重點參考中國藥典9012《生物樣品定量分析方法驗證指導(dǎo)原則》，需要考察系統(tǒng)適用性、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、稀釋可靠性、耐用性、殘留、基質(zhì)效應(yīng)、膜吸附、穩(wěn)定性等，以驗證方法準(zhǔn)確可靠。
  干擾考察：如加入了BES等pH穩(wěn)定劑來配制磷酸鹽，還需要考察BES對磷酸鹽結(jié)合的影響，另外還需要考察輔料、原料藥、空白制劑對磷酸鹽檢測的干擾。
  建議進(jìn)行ISR研究，以考察方法的準(zhǔn)確性。
  所有資料都需要按照等效性評價相關(guān)要求提供，如制劑來源、質(zhì)檢報告，分析計劃、分析報告、進(jìn)樣序列表、標(biāo)曲質(zhì)控匯總表等。
  五、體外磷結(jié)合藥動學(xué)及平衡研究曲線
  圖1碳酸鑭在pH3.0的40mM磷酸鹽體系中動力學(xué)結(jié)合曲線
  圖2枸櫞酸鐵在pH3.0和pH 7.5 40mM磷酸鹽體系中動力學(xué)結(jié)合曲線
  圖3枸櫞酸鐵在不同濃度的磷酸鹽平衡研究中Langmuir線性方程
  六、體外磷結(jié)合研究其他應(yīng)用
  除了抗高磷血癥藥物外，對于可能導(dǎo)致低磷血癥的補(bǔ)鐵劑（如蔗糖鐵、羧基麥芽糖鐵），也可以通過體外磷結(jié)果試驗評估藥物與磷酸根的結(jié)合能力，從而預(yù)測其在體內(nèi)引起低磷血癥的風(fēng)險，為臨床用藥提供安全性依據(jù)。
  湖南科銳斯醫(yī)藥的磷酸鹽動力學(xué)和磷酸鹽平衡結(jié)合研究平臺，已成功開發(fā)了碳酸鑭咀嚼片、枸櫞酸鐵片分析方法，并已經(jīng)助力客戶完成該品種體外磷酸鹽等效性評價研究。
  項目經(jīng)驗：目前已完成近500個品種的生物樣本檢測，接受國家局現(xiàn)場核查20余次，50+個品種獲得免核查。
  專業(yè)團(tuán)隊：以高級工程師領(lǐng)銜的核心骨干團(tuán)隊成員56人，本科及以上比例100%，碩士及以上占比41%。
  質(zhì)量體系：取得中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS）實驗室認(rèn)可證書。實驗過程采用電子化信息系（LIMS）統(tǒng)進(jìn)行全流程的記錄管理和生物樣本管理，并建立了滿足中美雙報的中英文體系。
  特色品種：
  外用制劑：洛索洛芬鈉凝膠貼膏、丙酸氟替卡松乳膏等
  復(fù)方制劑：復(fù)方甘草酸苷等
  內(nèi)源性物質(zhì)：熊去氧膽酸、二十碳五烯酸等
  體外磷結(jié)合劑：枸櫞酸鐵等